• 예약은 최소 3일전에 하도록 합니다. (하루 전 예약 시 관리자와 상의 합니다.)
• 예약시간부터 30분 후에는 도착하도록 합니다.
• 30분 후에도 도착하지 않을 시는 장비사용이 금지됩니다.
• 다음 예약자를 위해 시간을 준수합니다.
• 월-금요일 12시부터 8시까지는 1주일에 8시간 1일 4시간 이상을 예약할 수 없습니다.
• (12시부터 1시 30분 까지는 기계사용이 중지됩니다.)
• 추가 시간 필요 시에는 FACS 관리자와 상의합니다.
• FACS는 sorting 기능을 우선으로 사용합니다.
• 예약을 취소할 경우에는 최소 3시간 전에는 알립니다.
• 본인에게 부여된 ID 외에는 사용을 금지합니다,
• Sample과 Laser 종류를 미리 확인하도록 합니다.
• 사전에 이용 적합 여부를 담당자와 상의한 후 사용 일시를 예약합니다.
• 장비, 컴퓨터 이용 시 glove를 꼭 착용하도록 합니다.
• Cell Sorter Room안에서는 절대 음식을 먹거나 음료를 마시지 않습니다.
• 감염과 관련된 물질을 분석하는 경우 꼭 sample을 고정합니다.
• 연구용 검체는 실험자가 사전에 준비를 완료하여 차광상태(필요에 따라 냉장상태)로 의뢰합니다.
• 분석료 및 기기사용료는 매월 말 제출된 청구서에 따라 정산합니다.
• 신청서를 관리자에게 받아서 작성합니다.

위 치 : 광주 과학기술원 생명과학동 315호

담당자 : 김선혜

이메일 : 107690@gist.ac.kr

연락처 : 062)715-3551

Size

• Cell size는 nozzle size의 1/5~6을 넘지 않아야 한다.
  (70 , 85, 100, 130nm nozzle 가능)
• Cell size가 nozzle size보다 클 경우 clog가 생길 가능성이 있다.
• Nozzle size guideline:
  5-15 um = 70 um nozzle
  >16 um = 100 um nozzle
• Cell viability을 높이기 위해 큰 size의 nozzle을 사용 할 수도 있다.

Cell Adhesiveness

• Aggregation이 생기는 cell의 경우 strainer을 사용하도록 한다.
• Sorting 중 strainer을 위해 원하는 cell numbers보다 더 많은 양을 준비하도록 한다.
• 소량의 EDTA 또는 trypsinization이 Aggregation에 도움이 될 수 있다
• Clumping을 막기 위해 낮은 cell 농도를 권장한다.(event 5000~8000/s)

Cell Fragility/Physiology

• Sorting 한 후의 cell(Fragile cells or cells)은 안정 상태일 때 보다 cell viability가 감소할 수 있다.
• fragile cells인 경우 operator에게 미리 공지해주면 낮은 압력의 stream을 사용할 수 있다.

Concentration

• 평균적으로 5-10 X 106 /ml.
• fragile cells, adherent cells or large cells의 경우 더 낮은 농도를 사용한다.

Sorting Buffer

• sample buffer는 보통 PBS를 사용한다.
  1X Phosphate Buffered Saline (Ca/Mg++ free) + 1 mM EDTA + 25 mM HEPES pH 7.0+1% Fetal Bovine Serum (Heat-Inactivated) + 0.2 um filter sterilize, store at 4° C
• For sticky cells try increasing the EDTA to 5 mM
• For samples with a large number of dead cells, try adding 10 U/ml DNAase
• culture media는 사용하지 않는다.

Collection tube

• 15 ml Conical Catch tubes : 2mL buffer
  (PBS or Phenol red free Complete Media +10% FBS)
• 5 ml Falcon tubes: 1mL buffer
  (PBS or Phenol red free Complete Media +10% FBS)